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              kamiyabiomedical KT-470

              • 型   號:
              • 時   間:2019-04-16
              • 價   格:

              kamiyabiomedical KT-470
              小鼠心肌肌鈣蛋白-I酶聯免疫吸附試驗
              Mouse Cardiac Troponin-I ELISA
              用于小鼠血漿肌鈣蛋白I的定量測定。
              貨號 KT-470
              僅供研究使用
              產品
              K-分析小鼠心肌肌鈣蛋白-I酶聯免疫吸附試驗是一種酶免疫分析法,用于定量測定心肌
              小鼠血漿肌鈣蛋白-I。僅供研究使用。

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              kamiyabiomedical KT-470說明書

              小鼠心肌肌鈣蛋白-I酶聯免疫吸附試驗

              Mouse Cardiac Troponin-I ELISA

              用于小鼠血漿肌鈣蛋白I的定量測定。
              貨號 KT-470
              僅供研究使用

              kamiyabiomedical KT-470產品
              K-分析小鼠心肌肌鈣蛋白-I酶聯免疫吸附試驗是一種酶免疫分析法,用于定量測定心肌
              小鼠血漿肌鈣蛋白-I。僅供研究使用。

               ?
              介紹
              心肌肌鈣蛋白-I(ctni)是調節肌肉收縮的肌鈣蛋白復合物的組成部分。心臟損傷后,CTNI
              被釋放到血液中。因為它在心臟中有特殊的表達,所以它是心臟損傷的一個極好的生物標志物。在
              人CTNI水平在受傷后12-24小時達到峰值,2-6天內恢復到基線水平。在小鼠中,水平早在1
              1-3天內恢復正常。
              原理
              本試驗用于血漿樣品。酶聯免疫吸附試驗使用兩種不同的抗體,它們識別相對
              CTNI上的蛋白酶抗性表位。一種用于固相固定(微量滴定井)。第二個是共軛的
              對辣根過氧化物酶(HRP)進行檢測。首先用三體積的血漿稀釋血漿樣品。
              稀釋劑。然后將校準器和稀釋樣品與HRP共軛物在微量滴定池中培養1小時。這個
              結果CTNI分子夾在固定和檢測抗體之間。洗井到
              去除未結合的HRP共軛物。加入TMB,孵育20分鐘。如果存在CTNI,則形成藍色。顏色
              通過添加停止溶液停止顯影,將顏色變為黃色,并在450 nm處測量吸光度。
              CTNI的濃度與吸光度成正比,由校準曲線得出。
              組件
              •防CTNI涂層板(12 x 8孔條)
              •CTNI庫存校準器(凍干)
              •校準器稀釋劑,25毫升
              •血漿稀釋劑,25 ml
              •HRP共軛物,11 ml
              •20倍洗滌液,50毫升
              •TMB溶液,11毫升
              •停止溶液,11毫升

              所需但未提供的材料
              •移液器和吸管頭
              •蒸餾水或去離子水
              •聚丙烯或玻璃管
              •渦流攪拌機
              •吸水紙或紙巾
              •培養皿/搖床
              •板墊圈
              •能夠測量450 nm吸光度的讀板器。
              •曲線擬合軟件
              洗滌液準備
              洗滌液作為20倍的儲備提供。使用前,用950毫升蒸餾水稀釋瓶子(50毫升)的內容物。
              或去離子水。
              校準器準備
              1。按照小瓶標簽上的詳細說明,用去離子水或蒸餾水重新配制凍干的CTNI儲備。輕輕攪拌直到溶解的
              2。將7根聚丙烯管標記為10、5、2.5、1.25、0.625、0.313和0.156 ng/ml。
              三。在標記為10 ng/ml的試管中,移液管446.1微升校準稀釋液。然后加入53.9μl的原料,輕輕攪拌。這個
              提供10 ng/ml校準儀。
              4。用移液管將250微升校準稀釋液移入標有5、2.5、1.25、0.625、0.313和0.156 ng/ml的試管中。
              5。通過將250μl的10 ng/ml校準器與250μl的稀釋劑在管中稀釋和混合,制備5 ng/ml校準器。
              標記為5 ng/ml。同樣,通過兩倍串聯稀釋準備剩余的校準儀。
              重組后的CTNI儲備應在使用后立即冷凍。冷凍時保持穩定或至少1
              -20°C時為一個月,-70°C時為6個月。使用后丟棄工作校準儀。
              樣品采集與制備
              血漿(EDTA、檸檬酸鹽或肝素)應在血液采集后盡快制備,并在4°C下保存。
              應同樣處理樣品(即所有樣品的儲存時間和溫度應相同)。中頻等離子體
              樣品不能在采集后4小時內進行分析,應在-70°C下冷凍,使用前僅解凍一次。
              我們建議對樣品進行一式兩份的分析。分析前,血漿樣品應稀釋四倍
              血漿稀釋劑。這可以很容易地通過將100μl的每個血漿樣品與300μl的血漿稀釋劑混合
              聚丙烯微型離心管。
              一般說明
              1。所有試劑在使用前應達到室溫。
              2。解凍后,校準器稀釋劑中可能會出現沉淀物。應通過離心法去除沉淀物。
              在臺式離心機中以約3000轉/分的轉速運行5分鐘。使用干凈的上清液。
              三。在完全理解
              指導并遵守良好的實驗室慣例。
              4。清洗程序至關重要。洗滌不足將導致精度差和吸光度讀數錯誤升高。
              5。實驗室溫度會影響吸光度讀數。我們的酶聯免疫吸附測定試劑盒是用設置在
              150轉/分和25°C。在較低溫度下進行分析會導致吸光度值較低。

              測定程序
              1。將所需數量的8孔條固定在支架中。未使用的板條應存放在重新密封的袋子中
              4°C的干燥劑,以備將來使用。
              2。在每個孔中添加100μl的HRP共軛物。
              三。向井中注入100微升校準儀和稀釋樣品(我們建議校準儀和樣品試運行
              復制品)。
              4。在150轉/分和25°C的搖板機上培養1小時。
              5。使用平板墊圈(400μl/孔)排空并用1X洗滌液清洗5個微量滴度孔。
              6。在吸水紙或紙巾上用力敲打油井,清除所有殘留的液滴。
              7。向每個孔中分配100μl TMB。
              8。在150轉/分和25°C的軌道式微型平板振動篩上培養20分鐘。
              9。20分鐘后,通過向每個孔中添加100μl的停止溶液來停止反應。
              10。輕輕混合。務必確保所有藍色變為黃色。
              11。在5分鐘內用平板閱讀器讀取450納米的吸光度。
              計算結果
              1。使用曲線擬合軟件,通過繪制校準器的吸光度值與對數10的關系來構建校準曲線。
              濃度。
              2。將校準曲線擬合為四參數邏輯回歸(4pl)方程(x軸=log10濃度),并確定
              樣品的濃度(導出反對數)。
              三。將導出濃度乘以稀釋系數,以確定原始樣品中的實際濃度。
              4。如果A450值超出校準曲線,應適當稀釋樣品并重新測試。如果進一步稀釋
              需要時,新鮮解凍的血漿樣品應先用三體積的血漿稀釋劑(4倍稀釋)稀釋。這個
              然后用校準器稀釋劑稀釋所得混合物。
              典型校準曲線
              典型的校準曲線如下所示。這只是為了說明。必須為每個實驗生成校準曲線。

              存儲
              將凍干后的原料儲存在-20°C或以下。試劑盒的剩余部分應儲存在4°C,微量滴定板應
              放在裝有干燥劑的密封袋中。自購買之日起,套件將保持穩定6個月。

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